乳品中骨桥蛋白测定方法改进 高效液相色谱法解决难题

　　【化工仪器网 行业百态】骨桥蛋白是一种高度磷酸化的酸性糖蛋白，具有较强的钙结合特性。初步研究表明，骨桥蛋白可影响婴儿免疫功能的发育，促进免疫系统的成熟并有效预防病原性感染。此外骨桥蛋白还被认为在大脑发育中起作用，通过促进髓鞘形成在婴儿的大脑发育和行为发展中发挥重要作用。
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　　乳清骨桥蛋白在母乳中的含量很高，而在牛乳中的含量很少。现代乳基婴幼儿配方食品通常以牛乳为原料，添加骨桥蛋白可以使配方奶粉具有更接近母乳的功能，更符合婴幼儿的营养需求。
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　　现代父母对于婴幼儿食品的要求不仅是质量安全，还有对婴幼儿成长发育的有益影响。因此，强化骨桥蛋白的乳基婴幼儿配方食品更受市场欢迎。随之而来的是婴幼儿食品和乳品骨桥蛋白含量的检测需求。
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　　目前测定骨桥蛋白的方法多为酶联免疫法(ELISA)。ELISA作为酶免疫测定技术中应用最广的技术，有操作简单、特异性和敏感性高等优势。但目前的ELISA试剂盒主要针对人乳骨桥蛋白的测定，而对于牛乳骨桥蛋白开发的产品较少，准确度和灵敏度也无法满足要求。而且不同的商业化ELISA 试剂盒测定的浓度存在差异，这也影响到ELISA在实验室中的应用。
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　　此外，无胶筛分毛细管电泳法(NGSCE)、反相高效液相色谱法(RP-HPLC)和液相色谱法-串联质谱法(LC-MS/MS)等，也都存在诸多问题。如反相液相色谱法具有良好的线性、灵敏度、精密度以及回收率，能够简单、快速、准确的测定婴幼儿配方奶粉中的OPN，但这种方法可能会受到其它各种蛋白质的干扰。液相色谱质谱联用技术可以提供更大的特异性、速度和分析物范围，但是成本高，而且产品加工过程中的美拉德反应使得赖氨酸乳糖化修饰、胰酶作用位点失去特异性，导致特异肽段减少，会对质谱检测结果造成较大干扰，使检测出的骨桥蛋白含量偏低。
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　　为解决乳品中骨桥蛋白的检测问题，黑龙江飞鹤乳品有限公司、国家奶业科技创新联盟、中优乳奶业研究院(天津)有限公司、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所共同创建了创建了高效液相色谱测定方法，并制定团体标准《婴幼儿食品和乳品中骨桥蛋白的测定 高效液相色谱法》。该标准于近日通过审定。
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　　高效液相色谱法选用阴离子交换色谱柱作为分离柱，解决了不同乳制品及婴幼儿配方乳粉前处理过程中骨桥蛋白的分离和提取难题。不仅操作简单、成本低、普及性高，还能够解决目前使用最广泛的ELISA缺少满足要求的牛乳骨桥蛋白测定试剂盒的问题。
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　　骨桥蛋白测定方法的改进一方面可以为配方奶粉生产企业提供更有力的产品工艺研究工具，另一方面也为市场上的强化骨桥蛋白婴幼儿配方食品的质量提供了保障。
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　　(资料来源：《中国食品报》等)